Методика визначення ендотоксикозу за рівнем лейкоцитолізу в аутологічній плазмі

Для досягнення високої інформативності в діагностиці токсикозу доцільно поєднувати кількісні та якісні методи дослідження. Особливої уваги заслуговує методика визначення рівня токсикозу на основі якісного цитолюмінесцентного аналізу реакції лізису ізольованих лейкоцитів в аутологічній плазмі крові.

Важливою особливістю методики є можливість спостерігати і оцінювати цитотоксичну реакцію живих і персистуючих клітин. При цьому завжди враховують фазність деструктивного процесу - від руйнації зовнішньої оболонки клітини і виходу зсередини лізосомних гранул до фрагментації ядерної субстанції і повного цитолізу.

Незважаючи на якісну оцінку тестової реакції, висока чутливість та ілюстративність методики при достатньому рівні технологічності, точності і відтворюваності виводять її у ряд високоінформативних тестів діагностики ендотоксикозу.

Слід зазначити, що патогенетична сутність ініційованого токсинами лейкоцитолізу в організмі невиправдано залишається поза увагою клініцистів. Адже взаємодія лейкоцитів з токсичним субстратом тією чи іншою мірою завжди супроводжується втягненням компонентів комплементу, медіаторів запалення та імунітету, активацією системи кінінів, масивним вивільненням клітинних протеаз, аніонних та катіонних білків, простагландинів, вазоактивних амінів та інших біологічно активних речовин. Внаслідок лавиноподібного видиву на організм цього багатокомпонентного цитопатичного процесу розвиваються деструктивні явища, тяжчає клінічний перебіг основного захворювання. У схожій ситуації саме цю методику варто використовувати як для експрес-діагностики ендотоксемії, так і для динамічних спостережень. Наприклад, методика з успіхом може бути використана з метою оцінки ефективності детоксикаційної терапії, отримання необхідної інформації для формування прогностичного висновку.

Хід дослідження. Краплину (0,05 мл) нестабілізованої крові з пальця наносять на предметне скло й відразу змішують із рівним об’ємом розчину флюорохрому АО у розведенні 1:5000 на ізотонічному розчині хлориду натрію (pH6,5), покривають скельцем та витримують протягом 2 годин у термостаті при 37 °С. Досліджують у полі зору люмінесцентного мікроскопа, звертаючи увагу на форму клітин, їхні розміри, яскравість і колір люмінесцентного світіння.

Протягом двохгодинної інкубації токсини крові викликають різні за інтенсивністю та якісними проявами процеси цитодеструкції у вигляді типової реакції лейколізису, яка, проте, має чітко окреслені особливості, визначені методичними перевагами люмінесценції живих і персистуючих клітин.

Крім якісних цитопатичних змін, оцінку реакції токсино-модульо- ваного лейкоцитолізу визначають і за напівкількісними критеріями - на основі вирахування в мікропрепараті відсотка ушкоджених клітин за схемою:

Число пошкоджених клітин, %	Ступінь цитодеструкції	Умовні позначення реакції	Ступінь ендотоксикозу
До 10	незначний	±	0
11-20	помірний	+	1-й
21-30	виражений	++	2-й
31 і більше	різко виражений	+++	3-й